Selenoprotein determination in tissues of Atlantic salmon (Salmo salar)

Abstract

Selen er et viktig mikronæringsstoff for både mennesker og dyr, inkludert fisk som Atlantisk laks (Salmo salar), og har en viktig rolle innen antioksidantforsvar og proteinsyntese. Hos fisk så er kostholdet hovedkilden for selenopptak, men biotilgjengeligheten avhenger av kjemiske formen, som kan være enten organisk eller uorganisk. Inkorporeringen av selen i selenoproteiner, proteiner som inneholder aminosyren selenocystein, påvirkes av selenkilden som er tilsatt i fôret. Selenoproteiner er involvert i flere biologiske prosesser som antioksidantforsvar, regulering av skjoldbruskkjertelhormoner og immunsystemet. Derfor er det essensielt å forstå hvordan organiske og uorganiske kilder av selen påvirker uttrykksnivået og aktiviteten til selenoproteiner i Atlantisk laks for å sikre optimal helse og ernæring. Dette prosjektet hadde som mål å optimalisere prøveopparbeidingen for proteomikk-analyse av selen og selenoproteiner i lever, hjerne og nyre fra Atlantisk laks. Laksen be fôret med ulike kilder av selen som inkluderer dietter av høy mengde organisk og uorganisk selen, samt en kontroll diet. Prøveforberedelsen involverte en protein ekstraksjon, bruk av en filterassistert prøve protokoll (FASP) for å isolere protein/peptid forbindelsene, og et C18 fastfase-rense trinn for å fjerne salter og andre uønskede stoffer. Ekstraktene ble analysert av induktivt koblet plasma massespektrometri (ICP-MS) for å bestemme konsentrasjonen av selen i prøven, og for å bestemme retensjonen på tvers av prøveopparbeidingen. De bearbeidede prøvene ble deretter separert via høytrykks væskekromatografi (HPLC), og identifisert med tandem massespektroskopi (MS/MS). En variasjon i selenoproteinuttrykket ble observer, sannsynligvis grunnet ulik biotilgjengelighet og protein inkorporering av de organiske- og uorganiske formene av selen. Videre ble en bioinformatiske analyse utført på HPLC-MS/MS-resultatene som ga innsikt i effekten av ulike kilder av selen på det differensielle uttrykket av selenoproteiner.