Ligandaktivering av aryl hydrokarbon reseptor 2 (AhR2) fra Atlanterhavstorsk (Gadus morhua) ved bruk av luciferase genreportersystem

Abstract

Aryl hydrokarbon reseptor 2 fra atlanterhavstorsk (gmAhR2) er en ligandaktivert transkripsjonsfaktor som tidligere har blitt klonet og karakterisert som xenobiotisk sensor. Ved Universitetet i Bergen er det blitt etablert et luciferase genreportersystem for å studere ligandaktivering av gmAhR2. Formålet med denne masteroppgaven var med dette å optimalisere det etablerte luciferase genreportersystemet, og benytte dette systemet for å studere ligandaktivering av gmAhR2 ved eksponering for kjente AhR-ligander og «nye» miljøgifter. Luciferase genreportersystemet ble forsøkt optimalisert ved å endre cellekultur betingelser som inkubasjonstemperatur og eksponeringstiden for ligandeksponering. Tidligere studier har vist at disse endringene kan føre til økt sensitivitet og aktiveringsrespons i lignende genreportersystem. I motsetning, tyder funnene i denne oppgaven på at optimaliseringene som ble forsøkt ikke forbedret sensitiviteten eller økte aktiveringsresponsen til luciferase genreporter systemet benyttet. Det ble i oppgaven vist at gmAhR2 fra atlanterhavstorsk aktiveres av kjente AhR-ligander som blant annet 2,3,7,8-tetradiklorodibenzo-p-dioksin, benzo(a)pyren, β-naftoflavon, 3,3',4,4',5-pentaklorobifenyl og 6-formylindolo(3,2-b)carbazole. Videre ble ikke transkripsjonsfaktoren aktivert ved eksponering for «nye» miljøgifter som pesticidene endosulfan og klorpyrifos, samt oktametylsyklotetrasiloksan og dekametylpentasiloksan.