Kjernereseptorar og endokrinforstyrrande stoff: Ligandaktiveringsstudiar av human Pregnan X Reseptor (hPXR) og human Østrogen Reseptor alfa (hERalfa) med luciferase transfeksjonsassay

Abstract

Samandrag Pregnan X Reseptor (PXR) er ein kjernereseptor som ved aktivering kan indusere transkripsjon av CYP3A4 enzym. Desse enzyma er involvert i metabolisme av mange sambindingar som til dømes legemiddel. PXR vert aktivert ved å binde ligand. Det er identifisert svært mange ligandar for PXR. Aktivering av PXR kan altså seiast å vere ein sentral prosess i metabolisme utført av CYP3A4 enzymet. Det er derfor viktig med auka kunnskap om kva ligandar og ligandkonsentrasjonar som kan aktivere PXR. Også human østrogenreseptor α (hERα) er ein kjernereseptor som er involvert i mange fysiologiske prosessar i ein organisme. Det er vist at mange ligandar kan binde dei menneskeleg reseptorane hERα og hPXR. Målet med denne studien var dermed å undersøkje kva effektar ulike ligandar har på hPXR og hERα og om det eksisterar ein krysskommunikasjon mellom hERα og hPXR. Etablering av luciferase assaysystemet var nødvendig for å studere hERα og hPXR. Reporterkonstrukt vart danna ved å subklone responselement for hPXR og hERα inn i høvesvis eldfloge-luciferase vektor og renilla-luciferase vektor. Ekspresjonsplasmid og reporterplasmid vart transfektert inn i COS-1 celler og luciferase aktivitet vart målt på eit luminometer. Resultat viste at ved separat transfeksjon av hPXR og hERα vert hPXR aktivert av rifampicin, etynylestradiol og 4-nonylfenol og at hERα kan aktiverast av etynylestradiol. Resultat frå kotransfeksjonsforsøk av hPXR og hERα viste at hERα aktivitet vart påverka av hPXR ved eksponering for etynylestradiol og 4-nonylfenol. Desse preliminære resultata kan dermed tyde på at det eksisterar ein krysskommunikasjon mellom hPXR og hERα. Årsaka til denne effekten er usikker, men teoriar om at det eksisterar ein konkurranse om kofaktorar eller andre interaksjonar mellom hPXR og hERα dannar grunnlag for vidare studiar av hPXR og hERα i eit kotransfektert system.